LIBANORE, D. Z. (2008). Efeitos da terapia a laser de baixa intensidade (685 e 830nm) na taxa de proliferação bacteriana e na cicatrização de feridas cutâneas em modelo animal. Dissertação de Mestrado, Programa de Pós-Graduação Interunidades em Bioengenharia EESC/FMRP/IQSC, BIOENGENHARIA/USP, São Carlos/SP, abril de 2008.

Introdução: Recursos fisioterapêuticos tem sido utilizados no tratamento de úlceras de perna como a terapia a laser de baixa intensidade. A contaminação bacteriana dessas ulceras é freqüente constituindo-se numa importante complicação da cicatrização. Assim, busca-se investigar os efeitos dessa terapêutica frente às culturas de diferentes espécies bacterianas in vitro e in vivo. Material e Métodos: Utilizou-se aparelho laser modelo Theralase III- DMC (685 e 830nm) e diferentes doses (1, 2 e 4J). Foram utilizados bactérias, S. aureus ATCC 6538 (Gram+) e P. aeruginosa ATCC 15442(Gram-), reativadas em B.H.I.Agar inclinado a 37º C/24h. Após as bactérias foram re-suspensas em B.H.I. caldo/37ºC/20h, centrifugadas 3x/15min/ 4.500rpm, seguida de lavagens e homogeneização. A suspensão foi diluída em placas de cultura celular de 96 poços,submetidas a diluições seriadas sucessivas, encontrando as diluições ideais de 10-12 bactérias/ml para S. Aureus e 10-15 bactéria/ml para P. Aeruginosa. As soluções bacterianas foram irradiadas com laser de diferentes comprimentos de onda (685e 830nm) e diferentes doses (1, 2 e 4J). Dez micro litros da solução bacteriana do último poço foram semeados em placa de petri nos meios Mc Conkey Agar e B.H.I.-Agar bactérias Gram positiva e negativa respectivamente para posterior contagem das unidades formadoras de colônia (U.F.C.´s.). Foram semeadas 10 placas para cada dose de diferente comprimento de onda e espécie bacteriana diferente e 10 placas para o grupo controle, ou seja, sem irradiação laser. Nos estudos in vivo, foram utilizados coelhos, machos, neozelandeses pesando aproximadamente 1,5Kg. A anestesia foi feita com 1,5ml/ animal de ketamina 100mg e xylzina 1,0ml/ animal. Foram feitas 6 feridas de 6mm de diâmetro (punch) em cada orelha, constituindo-se cada animal, um grupo (n=12). As feridas foram previamente contaminadas com S. Aureus (G+) e P. Aeruginosa (G-). Os animais foram divididos em Grupo 1(laser 685nm + G+), Grupo2(laser 830nm + G+), Grupo 3(laser 685nm + G-), Grupo 4(laser 830nm + G-), Grupo 5 (apenas laser 685nm), Grupo 6(apenas laser 830nm), Grupo 7(lasers 685 e 830nm + G-), Grupo 8(lasers 685 e 830nm + G+). As ulceras foram fotografadas nos tempos de 24h, 3dias, 7dias, 10dias, 13 dias e 16 dias e posteriormente analisadas com programa Image J®, realizadas pelo mesmo indivíduo. Os resultados foram analisados pelo teste estatístico ANOVA e pós-teste de Bonferroni para múltiplas amostras não paramétricas. Resultados: No experimento in vitro foi observado que todas as doses laser utilizadas tiveram efeito inibitório no crescimento bacteriano em ambas as espécies, sendo esse efeito maior na dose de 4J/cm2, nos diferentes comprimentos de onda utilizados (685nm e 830nm), mesmo quando esses foram usados de forma consecutiva. In vivo, observou-se que no 3° dia pós cirúrgico houve uma diferença estatisticamente significante entre os grupos 1 e 6. No 7° dia a diferença estatística aconteceu entre os grupos 1 e 4. No 10° dia não houve diferença estatisticamente significante entre as áreas dos grupos. No 13° dia observou-se diferença estatística entre todos os grupos quando comparados com os grupos 7 e 8 (lasers 685 e 830nm + G+). No 16° de seguimento todas as feridas encontravam-se cicatrizadas. Conclusão: A terapia a laser de baixa intensidade apresentou efeito inibitório do crescimento bacteriano in vitro e nos estudos in vivo, mostrando-se capaz de acelerar o processo de cicatrização de feridas, mesmo contaminadas com diferentes espécies bacterianas. Palavras Chave: Terapia a laser de baixa intensidade, crescimento bacteriano, úlceras de perna, modelo animal, cicatrização.

LIBANORE, D. Z. (2008). Effects of low-level laser therapy (685nm and 830nm) in bacterial growth and wound healing in animal models. Dissertação de Mestrado, Programa de Pós-Graduação Interunidades em Bioengenharia EESC/FMRP/IQSC, BIOENGENHARIA/USP, São Carlos/SP, abril de 2008.

Introduction: Physical therapeutic resources have been used to treat leg ulcers, such as laser therapy of low intensity. Bacterial contamination of these ulcers often constitutes itself into a major complication of healing. Thus, search up to investigate the effects of this therapy off the cultures of different bacterial species in vitro and in vivo. Methods: It was used laser device model Theralase III-DMC (685 and 830nm) in different doses (1, 2 and 4J). It was used bacteria S. aureus ATCC 6538 (Gram+) and P. aeruginosa ATCC 15442 (Gram-), reactivated in tilted BHI-Agar to 37°C/24h. After the bacteria were re-suspended in broth B.H.I. to 37°C for 20h, centrifuged 3x/15min/4.500rpm, followed by washing and homogenization. The suspension was diluted in 96 wells cell culture plates, and submitted to successive serial dilutions, finding the ideas dilutions of 10-12 bacteria / ml for S.aureus and 10-15 bacteria/ml for P.aeruginosa. The bacterial solutions were irradiated with different wavelength of laser (685e 830nm) and different doses (1, 2 and 4J). Ten microliters of bacterial solution from the last well were sowed in Petri’s plate with Mc Conkey agar and BHI-agar to bacterias Gram positive and negative respectively for further counting of colony forming units (CFU's). Ten plates for each dose of different wavelength and different bacterial species were sowed and 10 boards for the control group, without laser irradiation.In the in vivo studies were used New Zealand male rabbits, weighing approximately 1.5 kg. Anesthesia was made with 1.5 ml of ketamine 100mg and xylzina 1.0 ml / animal. Six punched wounds were made in each ear, and each animal constituted a group (n = 12). The wounds were previously contaminated with S. aureus (G+) and P. aeruginosa (G-). The animals were divided in Group 1 (laser 685nm + G+), Grupo 2 (830nm laser + G+), Group 3 (laser 685nm + G-), Group 4 (laser 830nm + G-), Group 5 (only laser 685nm), Group 6 (only laser 830nm), Group 7 (lasers 685 and 830nm + G-), Group 8 (lasers 685 and 830nm + G+). The ulcers were photographed in times of 24 hours, 3, 7, 10, 13 and 16 days and then analyzed with Image J® software, conducted by the same individual. The results were analyzed by non parametric ANOVA statistical test and post-test for multiple samples by Bonferroni’s test. Results: In the in vitro experiments was observed that all the laser doses used presented an inhibitory effect on bacterial growth in both species, and this effect was greater using the dose of 4J in different wavelengths (685nm, 830nm), even when these were applied consecutively. In vivo, it was observed that in the 3rd day after surgery there was a statistically significant difference between groups 1 and 6. In the 7th day happened to statistical difference between groups 1 and 4. In the 10th day there was no statistically significant difference among the areas of groups. In the 13th day there was statistical difference between all groups when compared with groups 7 and 8 (685 and 830nm lasers + G+). In the 16th to follow all the wounds had been healed. Conclusion: The laser therapy of low intensity showed inhibitory effect of bacterial growth in vitro and in vivo studies and it were able to accelerate the wound healing, even contaminated with different bacterial species. Key Words: Low-level laser therapy; bacterial growth; leg ulcers; models, animal; wound healing.